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CGRP降鈣素基因相關(guān)肽

更新時(shí)間:2023/7/3

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降鈣基因相關(guān)肽放免藥盒操作說明書
                                                                                                 CGRPHY-041 RIA  KIT
 
降鈣素基因相關(guān)肽(Calcitonin gene related peptide CGRP)是近年來在人和哺乳動(dòng)物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的一種生物活性物質(zhì)。CGRP廣泛分布于中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)以及某些器官組織中,它是目前已知zui強(qiáng)的舒血管物質(zhì)。對(duì)各系統(tǒng)特別是心血管系統(tǒng)有著重要的調(diào)節(jié)作用。
CGRP在機(jī)體病理?xiàng)l件下的防御和代償意義已受到高度重視。一般認(rèn)為在正常生理狀態(tài)下,血漿CGRP和內(nèi)皮素(ET)濃度保持相對(duì)恒定。因此,測(cè)定血漿CGRP對(duì)于研究心肌缺血、腦卒中、高血壓、體外循環(huán)、血管再通以及組織移植都具有廣闊的臨床前景。
    藥盒組成:(常溫運(yùn)輸,4℃保存)
1、  緩沖液(PBS)1瓶,用時(shí)每瓶加蒸餾水至50ml   
2、PR分離劑(第二抗體)1瓶:用前充分搖勻
  3、CGRP抗體1瓶。        4、125I- CGRP 1瓶:
  5、CGRP標(biāo)準(zhǔn)品6瓶,濃度為20、60、150、300、600、1200pg/ml。
   樣品收集:
  1、血漿采集:
    取靜脈血3ml ,注入含10%EDTA.Na2  30ul和抑肽酶10ul(含100U/ml以上)的試管中混勻,4℃3000rpm/ min離心10min分離血漿,-20℃保存2個(gè)月,-70℃以下保存 半年。測(cè)定前,使樣本置于室溫或冷水中復(fù)融,混勻后,再次4℃3000rpm/ min離心5min,取上清測(cè)定。
     2、組織樣品的處理:
      取出活組織,吸去血跡,稱重,盡快放入1N HAC 1ml略做碾磨,然后在100℃水中煮沸10min,勻漿。4℃3000rpm/ min離心15min,取上清-20℃以下保存,測(cè)定時(shí)用PBS五倍以上稀釋,以調(diào)節(jié)PH值。每種組織的樣品非特異結(jié)合(U0)可能有差異,每份標(biāo)本單獨(dú)做一個(gè)U0。取組織的重量一般在100mg左右為好。
    
測(cè)定方法:(非平衡法加樣)
                       CGRP    RIA加液程序        (單位: ul )
             ————————————————————————————
                試   劑      T     NSB      S0   S1~S6    樣  品
             ————————————————————————————
               緩 沖 液    ——    300     200    ——      ——
               標(biāo) 準(zhǔn) 品    ——    ——    ——    200      ——
               樣    品    ——    ——    ——   ——      200
               抗    體    ——    ——     100    100      100
            ————————————————————————————
                              搖勻4℃ 放24小時(shí)                   
            ————————————————————————————
              125I- CGRP    100     100     100    100       100
            ————————————————————————————                   
                              搖勻4℃ 放24小時(shí)
            ————————————————————————————
               分 離 劑    ——     500     500    500      500     
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      混勻,室溫15分鐘, 3500 轉(zhuǎn)/分 4℃離心20分鐘,吸棄上清液,測(cè)定沉淀cpm數(shù)。
 
注:測(cè)定兔標(biāo)本時(shí),應(yīng)改用功25% PEG 作分離劑,每管加500ul,NSB、S0、S1~S6管補(bǔ)加正
     常人血清100ul/管(或r-球蛋白100 ul/管);U、U0管加PBS 100ul/管。
   
結(jié)果計(jì)算
    以N/T、B/T計(jì)算NSB、S0結(jié)合百分率,以B/B0計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)及待測(cè)樣品結(jié)合百分率,在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并查出樣品值, 或由自動(dòng)r計(jì)數(shù)儀預(yù)先編制程序。直接給出有關(guān)參數(shù),標(biāo)準(zhǔn)曲線及樣品濃度。
 
注意事項(xiàng):
     本月標(biāo)準(zhǔn)品每瓶用               ml緩沖液稀釋
         本月藥盒抗體每瓶用              ml緩沖液稀釋    
         本月藥盒標(biāo)記每瓶用              ml緩沖液稀釋 
     本月分離劑在使用前充分混勻(不可冰凍)
 
本試劑盒主要技術(shù)指標(biāo):
1.  NSB:5%。
2.  靈敏度:<15pg/ml。
3.  標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍:20~1200pg/ml。
4.  批內(nèi)變異系數(shù):CVw<7.0 %。
5.  批間變異系數(shù):CVw < 12.0% 。
6.  特異性:本抗血清與內(nèi)皮素(ET)、胃動(dòng)素(MTL)、骨鈣素(BGP)、C端甲狀旁腺素(C-PTH)、降鈣素(CT)等多肽均無(wú)交叉反應(yīng)。
7.  正常參考值:各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)自己的條件建立自己的正常對(duì)照組。
                      50.6±24.5pg/ml(n=25)。
   
 本次藥盒參考數(shù)據(jù):    
           ——————————————————————————————
                  T     NSB     S0          S1    S2   S  S4   S5     S6   
           ——————————————————————————————
            CPM
           ——————————————————————————————
                    N/T%        B0/T%      B/ B0 %       
           ——————————————————————————————   
 
      生產(chǎn)日期:
      有效日期:

FR-*-034 A 200 25800 過夜
血管緊張素Ⅱ (pg/ml
FR-*-035 Aldosterone 100 0.0625-2 過夜
醛固酮 (ng/ml
FR-*-036 ANP 100 0.0625-2 過夜
心鈉素 (ng/ml)
FR-*-037 β2-MG 50 0.210 37
β2-微球蛋白 ug/ml 1h
(寬范圍)    
FR-*-038 α1-MG 100 2-80 37
α1-微球蛋白 ug/ml 1h
FR-*-039 TXB2 200 12.5-400 過夜
血栓素B2 (pg/ml)
FR-*-040 6-Keto-PGFla 200 25-1600 過夜
6- (pg/ml)
FR-*-041 ET 200 20-1000 過夜
內(nèi)皮素 (pg/ml)
FR-*-042 CGRP 200 15-1200 過夜
降鈣素基因相關(guān)肽 (pg/ml)
FR-*-043 ACTh 100 5-405 過夜
促腎上腺皮質(zhì)激素 (pg/ml)

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