在ELISA試劑盒檢測實(shí)驗(yàn)中,包被原的性質(zhì)很重要,蛋白濃度,是否降解,這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識(shí)別,所以保留抗原很重要,做重組蛋白時(shí),要在冰浴下緩慢融化就是這個(gè)道理。就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些曠地空閑,從而排斥ELISA試劑盒后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。但有時(shí)因?yàn)樵囼?yàn)的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。
操作技巧:
1.加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
2.合理安排檢測量,以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。
3.吸取液體時(shí),要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
4.要盡量做雙孔實(shí)驗(yàn),這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性,ELISA試劑盒又能反映出試劑盒的精密度。
5.樣品稀釋液應(yīng)用加液器加注,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。
6.為防止樣品蒸發(fā),試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。
7.未使用完的酶標(biāo)板或者試劑,請(qǐng)于2-8℃保存。辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用。請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液。
8.ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中,加樣后及時(shí)放人孵箱,標(biāo)本較多時(shí),要分批操作。防止孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。
9.剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。
10.ELISA試劑盒洗滌時(shí)各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。
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