將抗原的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。
1.食品安全檢測(cè)ELISA試劑盒的操作原理:
ELISA的操作步驟:樣品收集保存、試劑準(zhǔn)備、溫育、洗板、顯色、比色、包被、加樣、加酶標(biāo)抗體、終止反應(yīng)、結(jié)果判定、
2.影響因素:
分子量、穩(wěn)定性、純化、包被濃度,抗體純度和產(chǎn)品質(zhì)量
盡管ELISA測(cè)定的操作步驟非常簡(jiǎn)單,但有可能會(huì)影響測(cè)定結(jié)果的因素卻較多,分布在測(cè)定操作的各步之中,尤以加樣、溫育和洗板為甚。為幫助大家分析查找測(cè)定中出現(xiàn)問題的可能原因,特對(duì)常見問題及原因歸納總結(jié)于下表。
臨床ELISA試劑盒測(cè)定中可能會(huì)出現(xiàn)的問題及可能的原因
問題可能的原因(非試劑盒本身的原因)
1.弱陽性質(zhì)控樣本檢測(cè)不出 溫育的時(shí)間或溫度不夠;顯色反應(yīng)時(shí)間太短;所用配制緩沖液的蒸餾水有問題
2.測(cè)定的重復(fù)性差 (相同樣本兩次測(cè)定結(jié)果不一致) 這是典型的由測(cè)定操作引起的問題,包括
(1)加樣本及試劑量不準(zhǔn);孔間不一致;
(2)加樣過快,孔間發(fā)生污染;
(3)加錯(cuò)樣本;
(4)加樣本及試劑時(shí),加在孔壁上部非包被區(qū);
(5)不同批號(hào)試劑盒中組分混用;
(6)溫育時(shí)間、洗板、顯色時(shí)間不一致;
(7)孔內(nèi)污染雜物;
(8)酶標(biāo)儀濾光片不正確;
(9)血清標(biāo)本未*凝固即加入,反應(yīng)孔內(nèi)出現(xiàn)纖維蛋白凝固或殘留血細(xì)胞,易出現(xiàn)假陽性反應(yīng)等。
3.白板
(陽性對(duì)照不顯色) (1)漏加酶結(jié)合物;
(2)洗板液配制中出現(xiàn)問題,如量筒不干凈,含酶抑制物(如疊氮鈉)等。
(3)漏加顯色劑A或B;
(4)終止劑當(dāng)顯色劑使用。
4.全部板孔均有顯色 (1)洗板不干凈;
(2)顯色液變質(zhì);
(3)加底物的吸光受酶污染;
(4)洗板液受酶等污染。
.3關(guān)鍵參數(shù)和功能幅度,相應(yīng)的性價(jià)關(guān)系
對(duì)于食品檢測(cè)ELISA試劑盒來說,進(jìn)口的試劑盒在中國(guó)市場(chǎng)上比國(guó)產(chǎn)的試劑盒占的份額要大,國(guó)產(chǎn)的食品檢測(cè)ELISA試劑盒主要是在天然毒素上面,國(guó)產(chǎn)的食品檢測(cè)ELISA試劑盒是在檢測(cè)各種天然毒素上面。就市場(chǎng)上比較早食品檢測(cè)ELISA進(jìn)口的主要是:R-biopharm、Neogen國(guó)產(chǎn)的試劑盒主要是:近來幾年市面上生產(chǎn)此類食品檢測(cè)ELISA檢測(cè)試劑盒的公司成長(zhǎng)迅速,在中國(guó)市面上占份額大的幾個(gè)公司:長(zhǎng)沙安迪、深圳綠詩源、三方圓、安圖,科華,索奧等 這幾個(gè)公司是的食品檢測(cè)ELISA試劑盒產(chǎn)品比較多,但是有很多以前做動(dòng)物酶免檢測(cè)試劑盒的公司也正在進(jìn)入食品安全檢測(cè)這個(gè)市場(chǎng)。
(5)是否需要生產(chǎn)商上門指導(dǎo)等復(fù)雜的
一般性食品檢測(cè)ELISA試劑盒的操作比較簡(jiǎn)單,不需要生產(chǎn)商去上門指導(dǎo),而且實(shí)驗(yàn)的成功率也大。
(6)產(chǎn)品是否成熟和試劑的穩(wěn)定性,供應(yīng)商和能否換貨等服務(wù)質(zhì)量
食品檢測(cè)ELISA試劑盒試劑已經(jīng)成熟,穩(wěn)定性好,在食品領(lǐng)域中的應(yīng)用還在擴(kuò)大;一般在試劑盒出現(xiàn)問題的試劑,只要提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告和以及殘留試劑,經(jīng)廠家鑒定確實(shí)屬于試劑本身問題的,可以提供退換貨服務(wù)。
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