ELISA試劑盒室內質量控制程序
臨床檢驗的檢測結果,每次或每天之間不可能*。決定允許的誤差范圍,以臨床上不造成誤診與漏診為準,通過以下步驟來確定質控范圍。
1) *條件下的測定誤差。
2) 已知值的血清在常規(guī)檢驗條件下的誤差。
3) 未知值的血清在常規(guī)檢驗條件下的誤差。
4) 臨床應用的要求。對任何一個試驗都應確定一個允許的誤差范圍,前題是滿足臨床要求。如允許誤差定得過小,在臨床上不存在任何意義,但為了符合該規(guī)定卻要花費很大人力、物力和時間。相反,如果將允許誤差定得過大,將使監(jiān)測系統(tǒng)察覺不到臨床上要求檢出的誤差,失去質控的意義。
1 *條件下已知值質控血清變異(optimal conditions variance,簡稱OCV)的測定
在本實驗室*條件下(包括操作者、試劑、儀器等)檢測質控血清20-30次,測得結果計算,求出該組數據的均值和標準差(SD)表示該實驗室的*工作質量。
現舉例說明HBsAg ELISA法檢測時OCV的測定。使用的質控制血清為臨界血清,HBsAg濃度為5ng/ml。在該實驗室中選擇素質、操作zui熟練的技術員進行認真地專門測定,選用*的試劑盒,檢測之前,將恒箱、加樣器等認真校正、調校正、調試,使用新的加樣吸頭等,即在*、的條件下進行檢測。除質控血清外同時測定陰性對照品和陽性對照品。并作雙份測定,得出2個吸光值(A值),求出X。連續(xù)作20次,求出20個X,即X1……X20。從這20個數據中,求出OCV的X和SD。
2常規(guī)條件下已知值質控血清變異(routine conditions variance-known value,簡稱 RCVK)的測定。
做常規(guī)檢驗的技術人員,在常規(guī)檢驗的條件下,將質控血清放在常規(guī)檢測樣本中,進行20次檢驗,結果計算同OCV法。一般認為RCV的SD在OCV的SD兩倍范圍內可以接受。
若太大應該查找原因,使其向OCV的SD值靠近。在改進實驗室條件后(例如較正加樣器,糾正洗板操作,調正溫育溫度等),重新進行RCVK的測定。如果RCVK的SD值更小,說明OCV不是*條件下測定的,應重新再測OCV。常規(guī)條件下,RCVK肯定要比OCV大。通過質控控制各項條件,使RCVK的數據盡可能接近OCV值。RCVK的數據反映該實驗室日常工作的質量,用于作質控圖,對室內檢驗的結果進行控制,每日檢驗的結果,報告能否發(fā)出。
3常規(guī)條件下,未知值質控血清變異(routine conditions variancl-unknown value 簡稱 RCVU)的測定
有時為了避免主觀性,再作RCVU測定。
測定步驟同RCVK,但檢測的操作者不知質控血清的定值,或在操作者不知哪份是質控血汪清的條件下進行常規(guī)檢驗,以排除操作者的主觀性。在此不再舉例說明。
4質控圖
通過以上三步驟,可以開始作室內質控圖,根據RCVK的和SD作質控框圖。利用質控圖可以對每次檢驗的結果進行監(jiān)測,當沒有更換另一批號試劑盒和另一批號質控血清時,該質控圖可以連續(xù)作下去。
ELISA試劑盒質控血清的S/CO值低于-2SD的范圍,屬"告警",應尋找原因并在質控圖上記錄查出的原因。
ELISA試驗中,各種檢驗項目的誤差允許范圍均有待在實踐中得出結論,以上只是舉例說明質控方法,不是定論。2SD是一般*的允許誤差限度。每批測定放一份質控血清時,一次超過2SD應作為"告警",二次超出2SD為"失控"。當質控過程中,出現失控時,出現失控時,應查找原因,通常是試劑盒或質控血清失效造成。更換試劑盒或更換質控血
清,找出原因糾正后重新檢驗。如果檢驗結果仍達不到要求或找不到原 因時,應重復進行OCV的檢驗。如果OCV檢驗的結果仍是好的,說明常規(guī)操作出現問題。
一般認為:①一次超出3SD;②連續(xù)二次超出2SD;③3-5次連續(xù)處于一側的2SD之內; ?、?~7次連續(xù)偏向橫軸的一側,均為失控。
第③、④種情況,單獨依靠記錄往往是不易察覺的,但在質控圖上可以清晰地發(fā)現這種失控。
5統(tǒng)計學計算方法--"即刻性"質控
以上介紹的質控方法基本上與臨床化學測定的質控方法相同,但ELISA有其特殊性,zui合適的質控方法尚待研究建立。有些實驗室不是每天進行ELISA項目的檢驗,而ELSIA試劑盒效期短,用一批號試劑盒連續(xù)常規(guī)測20次,難度較大。采用"即刻法"質控統(tǒng)計方法,只需連續(xù)測3次,即可對第3次檢驗結果進行質控。
"即刻法"的建立具體計算方法如下:
1)先將測定值從小到大排列
2)計算X和SD。
3)計算SDI上限和SDI下限值。
4)將SDI上限、SDI下限值與SDI值中的數字比較。當SDI上限值和SDI下限值<n2SD時,表 示處于控制范圍內,可以繼續(xù)往下測定,繼續(xù)重復以上各項計算;當SDI上限和SDI下限有 一值處于n2SD和n2SD值之間時,說明該值在2SD~3SD范圍,處于"告警"狀態(tài);當SDI上限和SDI下限有一值>n2SD時,說明該值已在3SD范圍之外,屬"失控"。數值處于"告警"和"失控"狀態(tài)應舍去,重新測定該項質控血清和病人樣本。舍去的只是失控的這次數值,其他次測定值仍可繼續(xù)使用。
即刻性質控統(tǒng)計方法,適于ELISA測定的質控。
ELISA試劑盒當檢測的數值超過20次以后,不必再使用"即刻法"質控統(tǒng)計計算,可以轉入常規(guī)的質控圖的質控。將前20次的數值求出的和SD作質控框架圖,第21次的數值,依次點入即可。
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