在試驗(yàn)室,對(duì)試劑預(yù)備一般不太留神,一般的做法是,ELISA試劑盒在試驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來即用,而疏忽了這種做法有或許影響后邊溫育時(shí)刻不行的疑問,其直接的結(jié)果是對(duì)一些弱陽性標(biāo)本的查看呈現(xiàn)假陰性。
加在孔壁上部的非包被區(qū),易致使非特異吸附。
溫育所需時(shí)刻與溫度成反比,即溫度越高,則所需時(shí)刻相對(duì)較短。
因而在ELISA測(cè)定中試劑的預(yù)備zui為要害的是,在試驗(yàn)開始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,再進(jìn)行測(cè)定,以使試劑盒在運(yùn)用前與室溫平衡。這么做的目的,首要是為了在后邊的溫育反響進(jìn)程中,能使反響微孔內(nèi)的溫度能較快地抵達(dá)所央求的高度,以滿足測(cè)定央求。
現(xiàn)在的產(chǎn)品ELISA試劑盒中的洗板液均需在試驗(yàn)室運(yùn)用時(shí)對(duì)所供應(yīng)的濃縮液稀釋制造,因而稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)確保質(zhì)量。此外,當(dāng)試劑盒以O(shè)PD為底物時(shí),則底物溶液應(yīng)在反響顯色前暫時(shí)制造。
ELISA試劑盒試驗(yàn)辦法操作規(guī)范,加血清樣本及反響試劑
在現(xiàn)在的ELISA產(chǎn)品試劑盒中,血清樣本的參加幾乎是*的要運(yùn)用微量加樣器參加樣本的進(jìn)程。
zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。
運(yùn)用微量加樣器加樣有必要留神的要害點(diǎn)是:加樣不行太快,要避免加在孔壁上部,不行濺起和發(fā)生氣泡。
加樣太快,無法確保微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。
濺起會(huì)對(duì)鄰近孔發(fā)生污染。
呈現(xiàn)氣泡則反響液界面有區(qū)別。ELISA試劑盒的參加在國產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加,除了要留神滴加的角度外,滴加的速度也很首要,滴加太快,很簡單呈現(xiàn)重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象,這么就會(huì)在孔內(nèi)的非包被區(qū)呈現(xiàn)非特異吸附,然后導(dǎo)致非特異顯色。
有時(shí)候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測(cè)定為陽性,下次測(cè)定為陰性,通常就是上述加樣及試劑的過失所構(gòu)成的溫育。
溫育是ELISA測(cè)定中影響測(cè)定勝敗zui為要害的一個(gè)要素。
ELISA作為一種固相免疫測(cè)定,抗原抗體的反響在固相上進(jìn)行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*,有必要在必定的溫度條件下反響必定的時(shí)刻。
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